2014年12月15日，衛生部臨床檢驗中心發(fā)布2015年全國外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測序檢測室間質(zhì)量評價(jià)通知，表示將于2015年度正式開(kāi)展全國外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測序檢測室間質(zhì)量評價(jià)。

室間質(zhì)量評價(jià)也稱(chēng)為能力驗證實(shí)驗（以下簡(jiǎn)稱(chēng)PT），是指多家實(shí)驗室分析同一標本并由外部獨立機構收集、反饋實(shí)驗室上報結果并評價(jià)實(shí)驗室操作的活動(dòng)，通過(guò)實(shí)驗室間的比對判定實(shí)驗室的校準、檢測能力以及監控其持續能力。長(cháng)期以來(lái)，PT一直是臨床實(shí)驗室和公共衛生實(shí)驗室質(zhì)量保證的一個(gè)重要組成部分。

室間質(zhì)評目的：提高實(shí)驗室外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測序檢測的質(zhì)量

衛生部對全國外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測序檢測展開(kāi)室間質(zhì)量評價(jià)，主要目的是提高實(shí)驗室外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測序檢測的質(zhì)量。通知原文如下：

“新一代高通量測序技術(shù)發(fā)展迅速，并已由實(shí)驗室研究進(jìn)入到臨床檢測應用，如外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）檢測、胚胎植入前遺傳學(xué)診斷（PGD和胚胎植入前遺傳學(xué)篩查（PGS）等，其中外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）檢測目前已有國家食品藥品監督管理總局（CFDA）批準的儀器和試劑。為提高實(shí)驗室外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測序檢測的質(zhì)量，衛生部臨床檢驗中心于2015年度正式開(kāi)展全國外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測序檢測室間質(zhì)量評價(jià)?！?/span>

2014室間質(zhì)評結果：絕大多數結果符合預期

這并不是衛生部第一次發(fā)布全國外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測序檢測室間質(zhì)量評價(jià)通知，2014年11月，為配合衛計委新一代高通量測序技術(shù)應用試點(diǎn)工作，衛生部臨床檢驗中心開(kāi)展了該項目的全國室間質(zhì)量評價(jià)活動(dòng)，并要求各臨床實(shí)驗室使用日常所用試劑和程序進(jìn)行檢測。以下是2014室間質(zhì)評主要結果，數據來(lái)源于《全國外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18 和 T13）高通量測序檢測室間質(zhì)量評價(jià)調查活動(dòng)結果報告 》。

1、樣本情況

本次共發(fā)放 20 個(gè)質(zhì)評樣本，編號分別為 1401、1402、1403、1404、1405、1406、1407、1408、1409、1410、1411、1412、1413、1414、1415、1416、1417、1418、1419、1420。樣本為人血漿，樣本量為 700μl。其中 15 份樣本用于本次PT 成績(jì)評價(jià)，5 份樣本用于正式質(zhì)評發(fā)放樣本類(lèi)型的參考，不納入本次 PT 成績(jì)評價(jià)。具體信息見(jiàn)下表。 

2、各檢測平臺使用的實(shí)驗室數及相關(guān)參數 

本次質(zhì)評涉及多個(gè)檢測平臺（由于 CFDA 為檢測儀器和配套試劑共同審批，因此本小結中所提及的檢測平臺，除 LDT 外，均同時(shí)代表該平臺及相應的配套試劑）。其中有醫療器械注冊證的檢測平臺：BGISEQ-100（武漢華大基因生物醫學(xué)工程有限公司），BGISEQ-1000（武漢華大基因生物醫學(xué)工程有限公司），DA8600（中山大學(xué)達安基因股份有限公司）等。其他檢測平臺有：NextSeq CN500，BioelectronSeq 4000，NextSeq 500，Ion Proton，Hiseq2000， Hiseq 2500，Ion torrent PGM。需要說(shuō)明的是，沒(méi)有醫療器械注冊證的試劑和儀器，均屬實(shí)驗室自用方法（laboratory developed test，LDT），具體不同平臺的參數見(jiàn)下表。

3、實(shí)驗室回報結果情況 

共計有 81 家實(shí)驗室回報質(zhì)評結果，4 家實(shí)驗室報告了兩個(gè)平臺的檢測結果，共計收到結果 85 份，其中有效結果 84 份（即回報結果完整、在截止日期內回報的結果）。醫院臨床實(shí)驗室共計回報 73 份結果，獨立實(shí)驗室回報 12 份結果?？傮w來(lái)說(shuō)，本次質(zhì)評絕大多數實(shí)驗室的檢測結果均符合預期結果。在 15 份 PT 評價(jià)樣本中，98.8% (83/84)的實(shí)驗室與預期結果完全相符，只有 1 家實(shí)驗室兩份陽(yáng)性樣本報告了“臨界/灰區”的結果，其余結果也均與預期結果相符，具體的總體結果回報情況見(jiàn)下表。 

4、各檢測平臺不同樣本的符合率情況 

一家使用 Hiseq 2500 的實(shí)驗室報告了 1405 和 1413 號樣本（預期結果為 T13 陽(yáng)性）“臨界/灰區”的結果。其他平臺所有實(shí)驗室檢測結果均與預期結果相符，無(wú)假陰性和假陽(yáng)性結果。 

5、各檢測平臺對所有樣本檢測的測序原始數據量和唯一比對 reads 數情況

6、PT 成績(jì)情況 

PT 成績(jì)≥80（即 80 和 100 分）的實(shí)驗室發(fā)放質(zhì)評合格證書(shū)；PT 成績(jì)<80 分的實(shí)驗室和未回報完整定性結果的實(shí)驗室發(fā)放質(zhì)評參加證書(shū)。本次質(zhì)評中，PT成績(jì)?yōu)?100 分的實(shí)驗室 83 家，PT 成績(jì)在 80~100 分（含 80 分）的實(shí)驗室 1 家。1 家實(shí)驗室獲得質(zhì)評參加證書(shū)。

對開(kāi)展高通量測序 NIPT 臨床檢測實(shí)驗室的啟示

在2014室間質(zhì)評的報告最后，衛計委指出：雖然各臨床實(shí)驗室的檢測結果良好，但基于本檢測項目在大多數實(shí)驗室均尚未對臨床開(kāi)展，因此，在將來(lái)正式開(kāi)展高通量測序 NIPT 臨床檢測中，仍需謹慎對待。 

盡管目前商業(yè)化的平臺（包括 CFDA 批準或正在進(jìn)行注冊的平臺）在生物信息學(xué)分析和結果判讀方面，進(jìn)行了簡(jiǎn)化，但是與以往臨床實(shí)驗室開(kāi)展的核酸檢測項目相比，基于高通量測序的 NIPT 仍然是一個(gè)相對復雜的檢測過(guò)程。通常，NIPT 的檢測流程包括：DNA 提取，文庫構建，文庫純化，文庫定量，文庫混合、測序以及結果分析的過(guò)程，完成一個(gè)批次的檢測至少需要 3~4 天，此外，在文庫構建和文庫定量中，會(huì )涉及到 PCR 擴增過(guò)程。 

因此，如實(shí)驗室開(kāi)展高通量測序 NIPT 的日常檢測，需為臨床基因擴增實(shí)驗室，具有一定的核酸檢測的基礎，選擇合適的檢測平臺，并進(jìn)行性能驗證，具備經(jīng)過(guò)嚴格培訓的高素質(zhì)實(shí)驗人員，建立實(shí)驗室檢測的標準操作程序，在每批次的檢測中需使用陰性質(zhì)控和弱陽(yáng)性質(zhì)控，參加室間質(zhì)量評價(jià)。

具體來(lái)說(shuō)，在本次質(zhì)評中，部分實(shí)驗室僅有兩個(gè)不同的區域，不符合臨床基因擴增實(shí)驗室的設置要求；在選擇檢測平臺時(shí)，醫院臨床實(shí)驗室不建議采用實(shí)驗室自用方法 (LDT)，因為L(cháng)DT 首先需要建立自配試劑的標準操作程序，然后還需對檢測系統（包括檢測儀器、試劑以及生物信息學(xué)算法）進(jìn)行性能評價(jià)，給出重復性、分析敏感性、分析特異性、臨床敏感性、臨床特異性、陽(yáng)性預測值以及陰性預測值等等性能指標，而目前來(lái)說(shuō)，對于單個(gè)臨床實(shí)驗室，要完成 NIPT 的性能評價(jià)是非常困難的；實(shí)驗室需建立標準操作程序，并需考慮到開(kāi)展大量樣本檢測后，出現文庫構建失敗、檢測過(guò)程操作錯誤、QC 未通過(guò)以及“灰區”樣本需復檢等情況，以及針對此情況，評價(jià)可能對檢測流程和報告時(shí)間產(chǎn)生的影響；在當前的實(shí)驗室環(huán)境條件下，儀器設備經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的運行后，是否仍能夠保持良好的性能，能否保持原有的 QC未通過(guò)率以及檢測失敗率；此外，也不排除技術(shù)快速的發(fā)展，新的檢測平臺的出現，或者在原有檢測平臺上的進(jìn)一步更新，導至現有的檢測平臺可能面臨更新或淘汰。 

臨床實(shí)驗室需明確，基于高通量測序的 NIPT，只是一種篩查試驗，而不是診斷試驗，遺傳咨詢(xún)和進(jìn)一步的檢測非常重要。并且由于檢測原理是基于外周血游離 DNA，因此具有一定的檢測局限性，例如母體嵌合、胎盤(pán)嵌合、雙胎、外周血胎兒游離 DNA 比例低等均會(huì )對結果產(chǎn)生影響。

總結：無(wú)創(chuàng )產(chǎn)前檢測離規范使用又近了一步

不管怎樣，衛計委發(fā)布室間質(zhì)評，就已預示著(zhù)這項技術(shù)成熟、臨床應用急需的檢測離規范使用又近了一步，而2014年率先通過(guò)室間質(zhì)評的技術(shù)平臺，例如上文提到的華大基因、達安基因、貝瑞和康、博奧生物等公司，無(wú)疑將在后續競爭中獲得合作終端和客戶(hù)更多的信任。

附：衛生部臨床檢驗中心2015年全國外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測序檢測室間質(zhì)量評價(jià)通知